Informasi

Dapatkah ELISA digunakan untuk mendeteksi enzim tanaman? Membuat uji untuk enzim baru

Dapatkah ELISA digunakan untuk mendeteksi enzim tanaman? Membuat uji untuk enzim baru


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Jika tujuannya adalah untuk menghasilkan uji cepat untuk enzim dari sumber tanaman, apa saja pilihan tipikalnya?

yaitu Bisakah seseorang melakukan sesuatu seperti: Menghasilkan antibodi terhadap enzim dan kemudian menggunakannya untuk membuat ELISA? Akankah injeksi hewan menjadi cara untuk menghasilkan antibodi spesifik yang dibutuhkan?

Jika tidak, apa yang biasanya dilakukan dalam kasus seperti itu. Bagaimana cara membuat pengujian untuk enzim baru dari sumber tanaman. Apakah ada pendekatan alternatif yang menghindari pembentukan antibodi?


Saya ingin menambahkan sesuatu di atas jawaban Chris.

Produksi antibodi biasanya merupakan proses yang cukup lambat (dan mahal), alternatif yang patut dipertimbangkan adalah tampilan fag (https://en.wikipedia.org/wiki/Phage_display). Setelah Anda menemukan fag yang secara efektif mengikat protein yang Anda minati, Anda dapat menggunakannya sebagai pengganti antibodi dalam apa yang disebut uji Phage-ELISA. Namun, ingatlah bahwa ELISA (atau Phage-ELISA) akan memberi Anda informasi tentang keberadaan dan konsentrasi enzim, itu tidak akan memberi Anda petunjuk apa pun tentang aktivitasnya.


Saya pikir rute yang paling menjanjikan menggunakan antibodi. Anda dapat mengembangkan ELISA atau melakukan analisis western blot pada bahan tanaman - keduanya membutuhkan antibodi yang baik dan spesifik. Untuk menghasilkan ini, protein bunga (atau setidaknya sebagian) disuntikkan ke hewan (biasanya tikus atau kelinci) dan kemudian antibodi dituangkan dari darah hewan-hewan ini. Antibodi ini bersifat poliklonal, tetapi pendekatan ini agak cepat dan dapat dilakukan dalam beberapa minggu.

Jika Anda ingin menggunakan sumber antibodi yang lebih berkelanjutan, sel penghasil antibodi dari hewan ini diisolasi, diabadikan, dan dicirikan sebagai klon tunggal untuk mendapatkan antibodi monoklonal.

Karena Anda menggunakan enzim, Anda juga bisa memikirkan tes aktivitas. Jadi substrat kromogenik atau fluorogenik dimetabolisme, atau Anda dapat menggunakan reaksi gabungan di mana enzim Anda menggunakan substrat yang diisi ulang oleh reaksi lain - contoh klasik di sini adalah reaksi gabungan yang menggunakan NADH atau ATP.

Dimungkinkan juga untuk mengukur laju metabolisme jika substrat atau produk enzim Anda menunjukkan fluoresensi. Kemudian Anda dapat mengukur penurunan substrat atau peningkatan produk Anda.


  • Pelat ELISA siap pakai dengan preparasi sampel yang cepat & sederhana
  • Performa yang akurat, sensitif, dan konsisten
  • Divalidasi pada serum, plasma, air liur, supernatan kultur sel, dan urin
Kucing.Tidak. Nama Produk Harga
L00847 Kit Deteksi Antibodi Netralisasi SARS-CoV-2 Mengutip
L00845 Kit Deteksi ELISA IgG&IgM Spike S1-RBD SARS-CoV-2 Mengutip
L00846 Kit Deteksi ELISA Antibodi Total SARS-CoV-2 NP&RBD Mengutip

Pelajari lebih lanjut tentang Kit Deteksi Antibodi Netralisasi SARS-CoV-2.


Tes ELISA

ELISA adalah singkatan dari "enzyme-linked immunosorbent assay." Pada tahun 1974, P. Perlmann dan E. Engvall mengembangkan tes tersebut sebagai pengganti tes radioimmunoassay tertentu, dan akhirnya menggantikan tes western blot untuk konfirmasi HIV. Tes ELISA serbaguna dan profesional medis dapat melakukannya dengan mudah dibandingkan dengan tes lain yang lebih rumit, banyak variasi tersedia secara komersial.

Apa itu tes ELISA?

Tes ELISA menggunakan komponen sistem kekebalan (seperti antibodi IgG atau IgM) dan bahan kimia untuk mendeteksi respons imun dalam tubuh (misalnya, terhadap mikroba menular). Tes ELISA melibatkan enzim (protein yang mengkatalisis reaksi biokimia). Ini juga melibatkan antibodi atau antigen (molekul imunologis) yang dapat membentuk reaksi antigen-antibodi untuk memberikan hasil positif atau, jika tidak bereaksi, hasil negatif. Contoh penggunaan tes ELISA termasuk mendiagnosis infeksi seperti HIV (human immunodeficiency virus) dan beberapa penyakit alergi seperti alergi makanan dan penyelidikan eksperimental untuk mengidentifikasi senyawa (antigen dari lisat sel dalam beragam organisme). Tes ELISA juga dikenal sebagai immunosorbent assay atau enzyme immunoassay ketika suatu enzim terikat pada zat lain sebagai indikator (dapat menyebabkan perubahan warna, misalnya).

Pengujian didasarkan pada pelat mikrotiter yang memiliki substrat fase padat (protein target, antigen) pada konsentrasi yang diketahui tetap pada pelat yang bila terkena antibodi yang memiliki indikator yang terpasang (pewarna untuk perubahan warna atau antibodi berlabel enzim) yang dapat menghasilkan perubahan warna. Tergantung pada kurva standar untuk penyerapan antibodi berlabel enzim versus tingkat antigen yang terkait dengan perubahan warna pewarna, tes dapat memberikan semi-kuotasi, kuantitatif, dan/atau identifikasi banyak zat yang beragam. Jenis tes ini disebut ELISA langsung.

Ada jenis lain dari tes ELISA. ELISA tidak langsung menggunakan antibodi sekunder untuk menempel pada substrat, dan ELISA sandwich yang menggunakan antibodi sebagai substrat yang difiksasi ke pelat mikrotiter. Untuk contoh dan detail tambahan, lihat http://ruo.mbl.co.jp/bio/e/support/method/elisa.html.

Jenis Tes ELISA

Tes HIV

Pengujian antibodi biasanya dilakukan pada sampel darah, sering kali menggunakan uji terkait-enzim yang disebut ELISA atau EIA. Dalam tes ini, serum seseorang dibiarkan bereaksi dengan protein virus yang telah diproduksi di laboratorium. Jika orang tersebut telah terinfeksi HIV, antibodi dalam serum akan berikatan dengan protein HIV, dan tingkat ikatan ini dapat diukur. Hasil AMDAL negatif biasanya tersedia dalam satu atau dua hari.

Apa gunanya tes ELISA?

Tes ELISA terutama mendeteksi protein (berlawanan dengan molekul dan ion kecil seperti glukosa dan kalium). Profesional medis sering menggunakan tes ELISA sebagai tes darah untuk mendeteksi antigen yang mungkin ada dalam darah. Zat yang terdeteksi oleh tes ELISA dapat mencakup hormon, alergen, antigen virus (demam berdarah, misalnya), antigen bakteri (TB, misalnya), dan antibodi yang dibuat tubuh sebagai respons terhadap infeksi (antibodi terhadap hepatitis B, untuk contoh) atau vaksinasi. Mereka juga dapat mengidentifikasi agen penyakit menular pada pasien.

Apa itu ELISA kit?

Kit ELISA adalah tes ELISA yang tersedia secara komersial yang biasanya berisi pelat polistiren yang telah dilapisi sebelumnya, antibodi pendeteksi, dan biasanya semua bahan kimia yang diperlukan untuk melakukan tes ELISA. Namun, orang dapat membeli kit khusus dengan zat yang ditunjuk oleh pelanggan.

SLIDESHOW

Bagaimana cara kerja pengujian ELISA?

Ada variasi tes ELISA (lihat di bawah), tetapi jenis yang paling banyak digunakan terdiri dari antibodi yang menempel pada permukaan padat (pelat polistiren). Antibodi ini memiliki afinitas untuk (akan menempel pada) zat yang diinginkan, seperti hormon, bakteri, atau antibodi lain. Misalnya, human chorionic gonadotropin hormone (HCG), protein yang biasa diukur yang mengindikasikan kehamilan, dapat dideteksi dengan ELISA. Campuran HCG murni yang terkait dengan enzim dan sampel uji (darah atau urin) ditambahkan ke sistem pengujian. Jika tidak ada HCG dalam sampel uji, maka hanya enzim terkait yang akan mengikat permukaan padat. Semakin banyak zat yang menarik yang ada dalam sampel uji, semakin sedikit enzim yang terikat pada permukaan padat. Semakin banyak zat yang diinginkan akan menyebabkan reaksi dan muncul pada pelat tes dalam beberapa cara, seperti perubahan warna larutan (atau seperti tes kehamilan "dua garis merah muda" atau tanda "+").


Substrat ELISA chemiluminescent

Kami menawarkan beberapa substrat chemiluminescent untuk pengembangan ELISA dengan horseradish peroxidase enzyme (HRP) dan alkaline phosphatase (AP):

Jumlah total pengujian berdasarkan pelat mikro 96-sumur. Lihat instruksi produk untuk informasi tambahan dan pertimbangan pengujian yang menentukan jumlah pengujian.
² Batas deteksi dan pengenceran antibodi yang direkomendasikan (berdasarkan stok 1 mg/mL) telah digeneralisasikan sebagai cara untuk memulai pengoptimalan. Pengujian individu mungkin memerlukan kondisi di luar rentang yang disarankan di sini.
Panjang gelombang emisi puncak diberikan untuk referensi. Namun, untuk sensitivitas terbaik, ukur total keluaran cahaya menggunakan luminometer.

Sekilas tentang substrat ELISA Chemiluminescent

CSPD dan CDP-Star merupakan substrat chemiluminescent 1,2-dioxetane alkaline phosphatase yang memancarkan cahaya dengan intensitas cahaya maksimum pada panjang gelombang 475 nm. Substrat ini adalah substrat "bercahaya" dan memberikan sinyal maksimum yang berkelanjutan dari waktu ke waktu hanya setelah 15–60 menit tergantung pada suhu. Mereka disuplai pada 5 atau 25 mM (masing-masing) dalam buffer berair. Sensitivitas dapat ditingkatkan dengan penambahan penambah pendaran Sapphire-II atau Emerald-II.

Substrat DynaLight dengan RapidGlow Enhancer adalah formulasi substrat chemiluminescent siap pakai yang telah dioptimalkan untuk mencapai hasil yang lebih cepat dalam pengujian berbasis larutan. Substrat ini diklasifikasikan sebagai substrat flash dan glow yang memberikan sinyal maksimum yang cepat dan berkelanjutan sedini 2–10 menit. Substrat DynaLight dengan formulasi RapidGlow Enhancer mencakup substrat chemiluminescent 1,2-dioxetane dan penambah polimer yang memungkinkan deteksi immunoassay ultra-sensitif dengan label alkaline phosphatase.

SuperSignal ELISA Pico Chemiluminescent Substrate memberikan kinerja yang sangat baik untuk sejumlah besar jumlah protein target dan mudah dioptimalkan untuk dideteksi dengan sensitivitas yang lebih besar daripada substrat kolorimetri tingkat awal. Pembuatan sinyal cepat dengan stabilitas sinyal 5-30 menit tergantung pada konsentrasi HRP.

SuperSignal ELISA Femto Maximum Sensitivity Substrate adalah salah satu substrat paling sensitif yang tersedia untuk aplikasi ELISA. Ketika dioptimalkan dengan benar, batas deteksi yang lebih rendah adalah 1 hingga 10 kali lipat lebih rendah daripada substrat kolorimetri yang umum digunakan. Namun, tanpa optimasi yang tepat, mudah untuk membanjiri sistem dengan protein dan enzim, sehingga menghasilkan latar belakang yang tinggi dan kemungkinan hasil negatif.


Immunoassays: Susunan Protein vs. ELISA dan Western

Studi sistem biologis telah berkembang melampaui paradigma 'satu gen, satu protein' ke bidang proteomik, atau mempelajari sejumlah besar protein yang bertindak dalam rangkaian sistem biologis yang kompleks. Jadi di era pasca-genom, teknologi telah didorong untuk memberikan pengujian multipleks yang memungkinkan kita memantau banyak protein secara paralel, menghasilkan informasi yang lebih relevan secara biologis. Tes multipleks digunakan untuk penelitian dasar dan penemuan obat untuk melihat ribuan protein, atau 'proteome' dalam sampel. Untuk diagnostik klinis, pemantauan hanya beberapa protein bersama dengan kontrol sudah cukup. Dalam kedua kasus, bagaimanapun, spesifisitas, sensitivitas, ketersediaan sampel, biaya reagen, dan kenyamanan penggunaan merupakan kriteria utama untuk memilih protokol.

Imunoassay masih merupakan platform pilihan untuk sebagian besar studi protein, terutama diagnostik klinis dan pengembangan obat, di mana spesifisitas sangat penting. Tes berbasis antibodi termasuk penangkapan kekebalan dalam perangkat aliran lateral, imunoblot (Western blot) dan ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) telah ada selama beberapa dekade, dan secara luas diadaptasi ke dalam diagnostik klinis. Paling sering, pilihan pertama adalah kenyamanan - menggunakan teknologi yang ada, dan yang telah disiapkan di lab atau komunitas tetangga. Artikel ini menjelaskan fitur dan manfaat relatif dari tes berbasis antibodi, membandingkan Western, ELISA, dan mikroarray protein.

Western Blots biasanya dilakukan untuk menentukan keberadaan dan integritas protein tertentu. Dalam pengujian ini, campuran protein pertama-tama dipisahkan berdasarkan berat molekul dan/atau muatan dengan elektroforesis dalam matriks gel, kemudian dipindahkan ke membran dan diperiksa dengan antibodi spesifik untuk protein yang diinginkan. Jumlah relatif protein dalam sampel yang berbeda dapat dibandingkan dan diperkirakan. Karena protein dalam campuran pertama-tama dipisahkan menurut sifat fisiknya, spesifisitas Western bisa sangat tinggi, dan setiap reaktivitas silang antibodi pendeteksi dengan protein lain dalam campuran dapat dibedakan berdasarkan berat molekul protein yang diketahui. bunga. Western blot terbatas pada deteksi protein terdenaturasi karena semua protein dalam sampel didenaturasi sebelum langkah elektroforesis. Pada sisi negatifnya, Western blot secara teknis relatif rumit, membutuhkan banyak langkah dan volume sampel yang relatif besar sehingga tidak mudah diotomatisasi dan relatif memakan waktu dan mahal.

Tes ELISA sering dilakukan di pelat 96-sumur dan dapat disesuaikan dengan throughput yang lebih tinggi daripada Western blots, tetapi seperti Western blots hanya menawarkan data monoplex, atau hasil dari satu protein per pengujian. Berbeda dengan uji Barat, ELISA dapat digunakan untuk mendeteksi protein asli, dan interaksi protein yang membutuhkan struktur tiga dimensi yang utuh. Tes ELISA bisa sangat kuantitatif ketika dijalankan dengan kurva standar dari protein yang diketahui, dan antibodi yang dicirikan dengan baik. Namun, pengujian ini tidak terlalu spesifik dan dapat memberikan hasil positif palsu karena reaktivitas silang antibodi pendeteksi dengan protein lain dalam sampel. Tes ELISA sangat berguna untuk melihat interaksi protein yang membutuhkan konformasi asli, dan untuk mempelajari kompetisi pengikatan. Selain itu, uji ELISA secara teknis tidak terlalu sulit dibandingkan Western blot, dan dapat disesuaikan dengan throughput yang lebih tinggi dengan sistem penanganan dan deteksi pelat otomatis.

Mikroarray protein lebih mirip dengan ELISA daripada Western blot karena umumnya protein dalam sampel tidak difraksinasi sebelum pengujian. Dalam membangun microarray, protein disimpan di tempat kecil (100-300 um) pada slide mikroskop yang dilapisi khusus. Slide sering dilapisi dengan polimer seperti nitroselulosa, atau gel yang meningkatkan kapasitas pengikatan protein. Microarrays menawarkan keuntungan dari throughput yang lebih tinggi, analisis multipleks, konsumsi reagen rendah, sensitivitas tinggi dan kebutuhan sampel yang lebih rendah dibandingkan dengan uji Barat atau ELISA (lihat Tabel I dan II).

Susunan protein yang tersedia secara komersial sekarang tersedia yang menawarkan susunan ratusan hingga ribuan protein yang telah dicetak sebelumnya, biasanya antibodi yang digunakan untuk menangkap protein seperti ELISA. Pembuatan microarrays sebenarnya merupakan proses yang memakan waktu dan mahal yang umumnya tidak layak untuk peneliti individu. Lebih penting lagi, kandungan antibodi yang terlihat pada microarray adalah komponen yang paling berharga dan mahal. Namun, jumlah antibodi yang dibutuhkan untuk microarray serta kebutuhan sampel jauh lebih sedikit daripada ELISA. Microarray protein menghemat reagen serta sampel berharga. Jadi untuk pengujian dengan throughput tinggi, atau pengujian yang sangat berulang, pengurangan biaya reagen, penghematan waktu, dan konservasi sampel untuk microarray dapat lebih besar daripada biaya relatif penyiapan (yaitu pencetakan atau pembelian array, lihat Tabel II). Selain itu, jumlah protein atau antibodi mungkin terbatas dalam beberapa kasus (misalnya, jumlah antibodi poliklonal atau sampel pasien yang terbatas untuk diagnostik).

Grace Bio-Labs telah mengembangkan teknologi terdepan untuk microarray protein yang sensitif dan berkualitas tinggi. Film-slide nitroselulosa kami memberikan kapasitas pengikatan protein tertinggi, menghasilkan sensitivitas yang sangat baik (hingga XX pg/ml). Kami telah mengembangkan rangkaian reagen yang dirancang untuk mengoptimalkan hasil dengan susunan ini dalam hal sensitivitas (sinyal/noise) dan reproduktifitas. Jika Anda tertarik untuk mengembangkan immunoassay dalam format protein microarray, kami mengundang Anda untuk bermitra dengan kami dengan konten pilihan Anda.

Tabel I: Sifat relatif Western Blot, ELISA dan Microarray Assays.


ELISA Langkah demi langkah

Antibodi penangkap spesifik diimobilisasi pada pelat pengikat protein tinggi dengan inkubasi semalam. Piring diblokir dengan protein yang tidak relevan mis. albumin.

Langkah ini dihilangkan saat menggunakan pelat pra-lapis Mabtech.


Infeksi virus influenza pada sistem pernapasan—cara pemantauan yang potensial

3.8 Uji imunosorben terkait enzim

ELISA adalah metode standar emas untuk mendeteksi berbagai molekul target yang dibantu dengan molekul pasangan yang sesuai. ELISA tidak hanya digunakan untuk deteksi tetapi juga untuk skrining dasar berbagai penyakit penting, seperti HIV, influenza, dan sebagainya. Gopinath dkk. 14 telah mendemonstrasikan deteksi virus influenza berbasis ELISA menggunakan antibodi anti-H3N2 dan membedakan virus influenza lainnya. Karena sensitivitas dan selektivitasnya yang tinggi, ELISA membantu mengidentifikasi molekul target, bahkan dalam sampel kasar manusia (serum, urin, dan air liur). Sampai saat ini antibodi banyak digunakan sebagai probe untuk mendeteksi biomolekul pada ELISA. Secara umum, pengikatan target (antigen) dan probe (antibodi) pada pelat ELISA dideteksi oleh enzim (misalnya, horseradish peroxidase (HRP), alkaline phosphatase) yang terkonjugasi dengan antibodi sekunder dan dideteksi oleh substrat kromogenik. Konjugasi biotin-streptavidin juga telah digunakan untuk meningkatkan metode ELISA. Dalam hal ini, antibodi sekunder terbiotinilasi dideteksi oleh enzim terkonjugasi streptavidin. Berbagai macam pola digunakan dalam metode ELISA untuk meningkatkan metode pendeteksian, seperti ELISA langsung, tidak langsung, sandwich, dan kompetitif. Dalam sebagian besar kasus, antibodi digunakan sebagai probe karena ikatannya yang kuat, stabilitas, dan selektivitasnya. Sandwich ELISA biasanya dilakukan oleh antibodi monoklonal atau poliklonal dari target spesifik (Gbr. 2.7). Dalam beberapa kasus, hanya wilayah Fc dari antibodi yang digunakan sebagai molekul penangkap pada pelat ELISA. Setelah generasi aptamer, beberapa peneliti telah menggunakan aptamer sebagai probe bukan antibodi. Metode ini disebut aptamer linked immunosorbent assay (ALISA). 46 Karena aptamer memiliki sensitivitas yang lebih tinggi daripada antibodi, maka dimungkinkan untuk meningkatkan batas deteksi ketika aptamer digunakan sebagai probe. Selain itu, ada kemungkinan untuk melakukan uji sandwich dengan dua aptamer berbeda untuk target yang sama. Karena aptamer dan antibodi cocok sebagai molekul pendeteksi, ada kemungkinan lebih tinggi untuk meningkatkan batas deteksi dengan pola sandwich menggunakan aptamer dan antibodi.

Gambar 2.7. Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

Pada dasarnya ada tiga jenis ELISA (langsung, tidak langsung, dan sandwich). Berikut sandwich ELISA ditampilkan sebagai contoh.


Abstrak

Veratrum californicum bertanggung jawab atas hilangnya banyak domba yang merumput di pegunungan tinggi di Idaho tengah pada 1950-an. Veratrum menginduksi berbagai cacat lahir termasuk cacat kraniofasial tipe cyclopic (domba berwajah monyet) yang secara khusus diinduksi pada domba setelah domba betina hamil merumput tanaman pada hari ke-14 kehamilan. Alkaloid steroid siklopamine (1) dan jervin (2) diisolasi dari Veratrum dan terbukti bertanggung jawab atas malformasi. Siklopamine (1) dan jervin (2) adalah teratogen kuat yang menghambat pensinyalan Sonic hedgehog (Shh) selama perkembangan embrionik tahap gastrulasi, menghasilkan cyclopia dan holoprosencephaly. Meskipun kerugian industri domba dari Veratrum sekarang relatif jarang, insiden toksikosis dan malformasi kraniofasial sesekali masih dilaporkan pada domba dan spesies lainnya. Namun, manfaat penelitian biomedis menggunakan cyclopamine (1) sebagai alat untuk mempelajari penyakit manusia telah berkembang pesat. Sebuah kompetitif penghambatan enzim-linked immunosorbent assay (ELISA) untuk mendeteksi dan mengukur siklopamin (1) dan jervin (2) dikembangkan menggunakan antibodi poliklonal yang diproduksi pada domba. Batas deteksi pengujian adalah 90,0 dan 22,7 pg untuk siklopamin (1) dan jervin (2), masing-masing. Uji ini digunakan untuk mendeteksi dan mengukur siklopamine (1) dibubuhi darah domba. Metode ekstraksi sederhana−ELISA yang dikembangkan dalam penelitian ini menunjukkan potensi penggunaan teknik ini untuk skrining cepat sampel biologis untuk mendeteksi keberadaan dan konsentrasi siklopamin (1) dan jervin (2) dan akan bermanfaat untuk studi farmakologi dan diagnostik ternak.

Kata kunci: ELISA enzyme-linked immunoassay cyclopamine jervine Veratrum californicum alkaloid

Penulis kepada siapa korespondensi harus ditujukan [telepon (435) 752-2941 faks (435) 753-5681 e-mail [email protected]].


Pengantar

Lebih dari setengah dari semua protein yang diketahui adalah glikosilasi, tetapi kami baru saja mulai memahami pentingnya oligosakarida kompleks (glikan) yang melekat pada tulang punggung protein [1]. Ini mungkin tidak mengejutkan, karena struktur gula yang bercabang membuat analisis glikokonjugat secara signifikan lebih menantang daripada analisis urutan DNA dan protein linier. Namun, bagian penting dari lebih dari setengah dari semua protein, dan hampir semua protein membran dan ekstraseluler adalah glikan [2]. Untuk dapat memahami fungsi glikoprotein, kita juga harus memahami bagian glikan mereka. Hal ini sangat penting dalam bidang diagnostik molekuler, di mana glycans terbukti semakin penting [3].

Struktur glikan sangat kompleks dan analisisnya memerlukan metode kompleks yang memakan waktu seperti HPAEC, HLPC fase normal atau spektrometri massa [4], [5], [6]. Metode ini tidak nyaman di laboratorium klinis rutin, dan metode yang lebih sederhana diperlukan untuk memungkinkan analisis glikosilasi untuk aplikasi klinis. Sejak diperkenalkan pada awal tahun tujuh puluhan [7], enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) telah digunakan untuk berbagai aplikasi, termasuk analisis glikosilasi. Selain metode yang menggunakan antibodi spesifik untuk analisis glikosilasi, metode modifikasi yang menggunakan lektin sebagai pengganti antibodi (ELLA—enzyme-linked lectin assay) juga telah dikembangkan [8]. Berlawanan dengan berbagai metode ELISA yang sekarang secara rutin digunakan secara klinis, metode ELLA digunakan oleh sejumlah kecil laboratorium penelitian (66244 artikel dengan ELISA vs. 86 artikel dengan ELLA di Judul atau Abstrak bidang PubMed antara tahun 1971 ketika ELISA pertama kali digunakan dan 2006). Alasan untuk situasi ini sangat kompleks, dan mencakup sifat glikosilasi, dan cara lektin berinteraksi dengan glikoprotein. Lektin mengenali struktur karbohidrat tertentu dan (setidaknya dalam kasus lektin tumbuhan yang digunakan sebagai alat untuk menganalisis glikosilasi) umumnya tidak berinteraksi dengan tulang punggung protein tempat struktur ini melekat. Jadi, ketika lektin digunakan untuk mempelajari glikosilasi, mereka mengukur keberadaan struktur karbohidrat yang sesuai pada semua protein dalam sampel yang dianalisis dan tidak hanya pada protein individu yang diinginkan. Untuk dapat menganalisis glikosilasi protein tertentu, protein ini harus dimurnikan atau ditangkap dengan antibodi spesifik yang diadsorpsi ke pelat mikrotiter. Pra-pemurnian protein tidak praktis untuk tujuan diagnostik, sehingga capture-ELLA akan menjadi metode pilihan. Namun, antibodi juga terglikosilasi yang secara signifikan menghambat aplikasinya untuk tujuan ini, lektin tidak hanya mengikat glikan pada protein yang ditangkap, tetapi juga pada glikan pada antibodi yang digunakan untuk menangkap protein dari sampel.

Dalam penelitian ini, kami telah memilih transferin sebagai model protein untuk pengembangan uji sederhana dan cepat untuk glikosilasi protein. Transferin serum khususnya merupakan protein yang menarik untuk analisis sialilasi. Sebagian besar molekul transferin dalam sirkulasi terglikosilasi dengan menempelkan hanya dua glycans biantenary sederhana (Gbr. 1) [9] yang menyederhanakan interpretasi hasil eksperimen. Perubahan glikosilasi transferin telah dilaporkan pada banyak penyakit [10], [11], [12], dan juga digunakan untuk mengidentifikasi kelainan bawaan glikosilasi dan penyakit hati [13]. Namun, semua metode yang diterapkan sebelumnya memakan waktu dan tidak dapat diterapkan di laboratorium klinis rutin. Bertujuan untuk memungkinkan analisis rutin serum transferin sialylation, kami telah mengembangkan metode ELLA yang sederhana dan andal yang menangkap transferrin menggunakan antibodi teroksidasi periodat dan membandingkan sialilasinya dengan sampel standar.


Layanan Terkait ELISA

Apakah menghasilkan antibodi khusus untuk ELISA atau membawa produksi kit ELISA di rumah, GenScript ada di sini untuk membantu. Layanan MonoExpress™ kami ideal untuk ELISA langsung yang bersih dan jelas, sementara layanan PolyExpress™ sempurna untuk menghasilkan antibodi deteksi terhadap target Anda. Layanan pelabelan antibodi kami terintegrasi dengan mulus dengan proyek apa pun, membuat pembuatan ELISA khusus menjadi mudah. Kami bahkan menghasilkan antibodi berpasangan yang dioptimalkan untuk ELISA sandwich khusus. Beberapa layanan terkait lainnya meliputi:

    membuat pengujian PK atau PD obat antibodi terapeutik menjadi mudah karena hanya mendeteksi CDR dari antibodi target. , spesialisasi kami. Menghindari produksi antigen protein in vitro dan menangani target yang sulit. menyediakan hingga 1 mg antibodi rekombinan hanya dalam waktu 3 minggu untuk skrining cepat.

Dengan 12 tahun pengalaman mengembangkan antibodi khusus, proyek Anda berada di tangan para ahli. Dapatkan kutipan hari ini!


Tonton videonya: Kelompok 7Antibodi Monoklonal u0026 ELISA5A (Juni 2022).


Komentar:

  1. Edsel

    A very fun idea

  2. Tojarg

    Maaf, tapi, menurut pendapat saya, ada kesalahan. Saya mengusulkan untuk membahasnya. Menulis kepada saya di PM, itu berbicara kepada Anda.

  3. Shalkree

    Saya menyesal, bahwa saya tidak dapat membantu Anda. Saya pikir, Anda akan menemukan di sini keputusan yang tepat.

  4. Bardulf

    Menurut saya, Anda tidak benar. Mari kita bahas. Menulis kepada saya di PM, kami akan berkomunikasi.

  5. Tobyn

    I think I've already read about it somewhere

  6. Mazum

    Pikiran yang sangat menarik, diceritakan dengan baik, semuanya hanya diletakkan di rak

  7. Halsey

    bear ... I would like this :)))

  8. Shiye

    Sebelumnya saya berpikir secara berbeda, terima kasih atas bantuan dalam pertanyaan ini.



Menulis pesan