Informasi

Komponen sel yang bermuatan negatif manakah yang mengikat kompleks kristal violet pada pewarnaan gram?

Komponen sel yang bermuatan negatif manakah yang mengikat kompleks kristal violet pada pewarnaan gram?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Gram positif memiliki komponen negatif pada lapisan peptidoglikan berupa ikatan fosfodiester asam teikoat, dan gram negatif memiliki komponen negatif pada membran luarnya berupa lipopolisakarida. Apakah itu tempat kristal violet mengikat?


Pewarnaan gram bergantung pada perbedaan membran bakteri. Bakteri gram positif memiliki lapisan peptidoglikan tebal di atas membran sel, bakteri gram negatif memiliki lapisan lipid di luar diikuti oleh lapisan peptidoglikan tipis dan kemudian membran sel. Lihat gambar untuk klarifikasi (dari sini):

Crytall violet berdisosiasi menjadi molekul pewarna bermuatan positif (CV+) dan klorida (Cl-). CV+ bergerak di antara lapisan membran (membran luar dan dalam) dan terperangkap di sana dengan penambahan yodium. Ini digunakan untuk membentuk kompleks kristal violet-iodin besar yang dipertahankan selama proses destaining.

Dalam proses destaining, lapisan peptidoglikan bakteri gram positif mengalami dehidrasi dan karena itu menyusut yang mencegah pewarnaan agar tidak hilang. Pada bakteri gram negatif, lapisan lipid luar dihilangkan dan lapisan peptidoglikan (yang jauh lebih tipis) terbuka yang memungkinkan penghilangan noda. Asam teikoat penting untuk kekakuan membran tetapi tidak untuk pengikatan itu sendiri.

Referensi:

  1. pewarnaan gram
  2. Noda Gram setelah Lebih dari Satu Abad
  3. Penggunaan pewarnaan Gram dalam mikrobiologi

Amplop sel bakteri terbagi dalam dua kategori utama: tipe gram positif dan tipe gram negatif, dibedakan dengan pewarnaan Gram. Kedua jenis mungkin memiliki kapsul polisakarida penutup untuk perlindungan ekstra. Sebagai kelompok ini dikenal sebagai bakteri berkapsul polisakarida.

Seperti pada organisme lain, dinding sel bakteri memberikan integritas struktural pada sel. Pada prokariota, fungsi utama dinding sel adalah melindungi sel dari tekanan turgor internal yang disebabkan oleh konsentrasi protein dan molekul lain yang jauh lebih tinggi di dalam sel dibandingkan dengan lingkungan eksternalnya. Dinding sel bakteri berbeda dari semua organisme lain dengan adanya peptidoglikan (poli-n-asetilglukosamin dan n-acetylmuramic acid), yang terletak tepat di luar membran sitoplasma. Peptidoglikan bertanggung jawab atas kekakuan dinding sel bakteri dan untuk penentuan bentuk sel. Ini relatif berpori dan tidak dianggap sebagai penghalang permeabilitas untuk substrat kecil. Sementara semua dinding sel bakteri (dengan beberapa pengecualian misalnya parasit intraseluler seperti: mikoplasma ) mengandung peptidoglikan, tidak semua dinding sel memiliki struktur keseluruhan yang sama. Hal ini terutama diungkapkan melalui klasifikasi menjadi bakteri gram positif dan gram negatif.


STREPTOKOKUS | pengantar

Streptokokus piogenik dan lainnya

Agar medium colistin crystal violet sulfamethoxazole trimethoprim (CCSXT) ( Tabel 8 ) banyak digunakan untuk mendeteksi streptokokus grup A bersama-sama dengan beberapa tes konfirmasi lainnya. Tes biokimia, mudah dilakukan di laboratorium, merupakan alternatif yang dapat diterima untuk studi serologis untuk mengidentifikasi streptokokus piogenik (Tabel 9).

Tabel 8 . Komposisi agar colistin crystal violet sulfamethoxazole trimethoprim (CCSXT)

Intisari pankreas dari kasein, bubuk14,5 g
Intisari papaic dari bungkil kedelai, bubuk5 gram
Natrium klorida5 gram
Kristal ungu0,2 mg
Kolistin sulfat10 mg
Sulfametoksazol24 mg
trimetoprim1,25 g
Agar15 gram
Air sulingan950 ml

Rendam selama 15 menit, periksa dan jika perlu sesuaikan pH menjadi 7,3 ± 0,2, didihkan untuk melarutkan bahan dan sterilkan selama 20 menit pada 121 °C. Dinginkan dengan cepat hingga kira-kira 50 °C, tambahkan 50 ml darah domba yang telah didefibrinasi, campur dengan rotasi lembut, dan tuangkan ke dalam cawan Petri.

Tabel 9 . Diferensiasi streptokokus dengan penggunaan tes biokimia

Kerentanan terhadapPYRtes CAMPHidrolisis hippuratecairan empeduPertumbuhan dalam 6,5% NaClKerentanan optochin dan empedu
BacitracinSXT
S. pyogenes (grup A)++
S.agalactiae (grup B)A+++ A
Koloni besar (grup C dan G)A+
S. pneumoniae +
S. equi subsp. sama D+

Simbol: +, positif , negatif d, strain dependen SXT, sulfametoksazol dan trimetoprim PYR, uji pyrrolidonyl arylamidase CAMP, uji peningkatan hemolisis dengan Stafilokokus aureus beta lisin.

a Pengecualian terjadi sesekali.

Streptokokus Lancefield grup D akan tumbuh pada media yang mengandung empedu dan dapat dibedakan dari streptokokus lain dengan hidrolisis cepat aesculin dengan adanya 40% empedu. Mereka dapat ditentukan dengan menggunakan media kanamisin aesculin agar (KAA) (Tabel 10).

Tabel 10 . Komposisi agar kanamisin aesculin (KAA)

tripton20 gram
Bubuk ekstrak ragi5 gram
Kanamisin sulfat0,02 g
Natrium klorida5 gram
Natrium sitrat1 gram
Aesculin1 gram
Ferri amonium sitrat0,5 g
Natrium azida0,15 g
Agar15 gram
Air sulingan1 l

Rendam selama 15 menit, periksa dan jika perlu sesuaikan pH menjadi 7,0 ± 0,1 dan didihkan untuk melarutkan bahan sepenuhnya. Sterilkan selama 15 menit pada suhu 121 °C hingga sekitar 47 °C.


Pewarnaan Gram

Gambar 5. Bakteri diwarnai dengan pewarnaan Gram.

Pada tahun 1884, dokter Hans Christian Gram sedang mempelajari etiologi (penyebab) penyakit pernapasan seperti pneumonia. Dia mengembangkan prosedur pewarnaan yang memungkinkan dia untuk mengidentifikasi bakteri di jaringan paru-paru yang diambil dari pasien yang meninggal sebagai agen etiologi dari jenis pneumonia yang fatal. Meskipun tidak banyak membantu dalam pengobatan penyakit, metode pewarnaan Gram membuatnya lebih mudah untuk mendiagnosis penyebab kematian seseorang pada otopsi. Hari ini kami menggunakan teknik pewarnaan Gram untuk membantu identifikasi bakteri, dimulai dengan klasifikasi awal menjadi salah satu dari dua kelompok: Gram positif atau gram negatif.

Sifat diferensial dari pewarnaan Gram didasarkan pada kemampuan beberapa sel bakteri untuk mempertahankan pewarna primer (violet kristal) dengan menolak proses dekolorisasi. Pewarnaan gram melibatkan empat langkah. Sel pertama diwarnai dengan kristal violet, diikuti dengan penambahan zat pengikat untuk pewarnaan (yodium). Kemudian alkohol diterapkan, yang secara selektif menghilangkan noda hanya dari sel Gram negatif. Akhirnya, pewarna sekunder, safranin, ditambahkan, yang melawan sel-sel yang tidak berwarna merah muda.

Meskipun Gram tidak mengetahuinya pada saat itu, perbedaan utama antara kedua jenis sel bakteri ini adalah dinding selnya. Dinding sel gram negatif memiliki membran luar (juga disebut amplop) yang larut selama pencucian alkohol. Hal ini memungkinkan pewarna kristal violet untuk melarikan diri. Hanya sel-sel yang tidak berwarna yang mengambil pewarna merah muda safranin, yang menjelaskan perbedaan warna antara kedua jenis sel tersebut. Pada akhir prosedur pewarnaan Gram, sel Gram positif tampak ungu, dan sel Gram negatif tampak merah muda.

Ketika Anda menginterpretasikan apusan pewarnaan Gram, Anda juga harus menjelaskan morfologi (bentuk) sel, dan susunannya. Pada Gambar 5, ada dua jenis bakteri yang berbeda, dapat dibedakan dengan reaksi pewarnaan Gram, dan juga berdasarkan bentuk dan susunannya. Di bawah ini, jelaskan karakteristik kedua bakteri ini:

Bakteri gram positif: Bakteri gram negatif:
Morfologi
Pengaturan

Prosedur Pewarnaan Gram

Persiapan Smear

Perbaiki bahan pada slide dengan metanol atau panas. Jika slide tetap panas, biarkan dingin saat disentuh sebelum mengoleskan noda.

Prosedur/Protokol Pewarnaan Gram:

  1. Apusan sel yang dikeringkan dengan udara dan tahan panas selama 1 menit dengan kristal ungu reagen pewarnaan. Harap dicatat bahwa kualitas apusan (konsentrasi sel yang terlalu berat atau terlalu ringan) akan mempengaruhi hasil pewarnaan Gram.
  2. Cuci slide dalam aliran air keran yang lembut dan tidak langsung selama 2 detik.
  3. Banjir longsor dengan mordan: yodium gram. Tunggu 1 menit.
  4. Cuci slide dalam aliran air keran yang lembut dan tidak langsung selama 2 detik.
  5. Perosotan banjir dengan zat penghilang warna (penghilang warna aseton-alkohol). Tunggu 10-15 detik atau tambahkan setetes demi setetes ke slide sampai zat penghilang warna yang mengalir dari slide habis.
  6. Banjir slide dengan counterstain, safranin. Tunggu 30 detik hingga 1 menit.
  7. Cuci slide dalam aliran air keran non-Yahudi dan tidak langsung sampai tidak ada warna yang muncul di limbah dan kemudian keringkan dengan kertas penyerap.
  8. Amati hasil prosedur pewarnaan di bawah minyak imersi (100x) menggunakan mikroskop lapangan terang.

Jika Anda kesulitan mengingat reagen pewarna yang digunakan dalam prosedur ini dan urutannya, Anda dapat mengingat kalimat ini “Com Sayan Adan Stain” yaitu urutannya adalah Cungu kristal, Sayaodin, Alcohol/Acetone dan yang terakhir adalah Safranin.


Perbedaan struktur bakteri Gram positif vs Gram negatif

Diagram di bawah ini menggambarkan perbedaan struktur bakteri Gram positif dan Gram negatif. Dua fitur utama yang menyebabkan perbedaan sifat visualisasi spesies Gram positif dan Gram negatif adalah ketebalan lapisan peptidoglikan dan ada tidaknya membran lipid luar. Ini karena struktur dinding mempengaruhi kemampuan sel untuk mempertahankan pewarna kristal violet yang digunakan dalam prosedur pewarnaan Gram yang kemudian dapat divisualisasikan di bawah mikroskop cahaya.

Bakteri gram positif memiliki lapisan peptidoglikan yang tebal dan tidak memiliki membran lipid luar sedangkan bakteri gram negatif memiliki lapisan peptidoglikan yang tipis dan memiliki membran lipid luar.

Karena bakteri Gram positif tidak memiliki membran lipid luar, jika mengacu pada strukturnya daripada sifat pewarnaannya, disebut monoderm. Membran lipid luar yang dimiliki oleh bakteri Gram negatif berarti, jika mengacu pada struktur fisiknya, disebut diderms.

Teknik pewarnaan Gram dikembangkan pada tahun 1884 oleh ahli bakteriologi Denmark Hans Christian Gram 1 . Sementara pewarnaan Gram tidak akan memberi tahu Anda spesies spesifik yang Anda lihat, ini bisa menjadi cara cepat untuk mempersempit daftar kandidat potensial dan pengujian tindak lanjut langsung jika diperlukan.


BAKTERI GRAM-NEGATIF ​​VS GRAM-POSITIF

  1. amplop sel: perbedaan pertama antara bakteri Gram-positif dan Gram-negatif terletak pada ketebalan dinding sel. Selubung sel organisme gram positif terdiri dari dinding sel yang lebih tebal dibandingkan dengan bakteri Gram positif.
  2. Membran lipid: Bakteri Gram-positif tidak memiliki membran lipid luar sedangkan bakteri Gram-negatif memiliki membran lipid luar.
  3. Ruang periplasma: periplasma adalah struktur antarmembran, terletak di antara membran sel dan membran luar (unik untuk sel gram negatif). Ruang ini ada pada bakteri Gram-negatif sementara kadang-kadang tidak ada pada bakteri Gram-positif.
  4. Lapisan peptidoglikan: Pada bakteri Gram-positif, lapisan peptidoglikan dinding selnya tebal. Namun, lebih tipis pada bakteri Gram-negatif.
  5. Ketahanan terhadap tekanan osmotik: karena lapisan peptidoglikan yang lebih tebal, dinding sel gram positif lebih tahan terhadap tekanan osmotik dibandingkan dengan bakteri gram negatif.
  6. Pewarna yang digunakan: pewarna kristal violet (ungu atau biru) digunakan untuk mengidentifikasi bakteri Gram-positif. Di sisi lain, safranin digunakan untuk mengidentifikasi bakteri Gram-negatif yang memberikan warna merah muda atau merah.
  7. Resistensi terhadap antibiotik: Bakteri gram negatif lebih resisten terhadap antibiotik dibandingkan dengan bakteri gram negatif. Kemampuan resistensi bakteri Gram-negatif ini membuat mereka lebih berbahaya.

Dinding Sel Negatif Gram:

Bakteri Gram-negatif memiliki lapisan peptidoglikan yang lebih tipis (10% dari dinding sel) dan kehilangan kompleks kristal violet-iodin selama dekolorisasi dengan pembilasan alkohol, tetapi mempertahankan counter stain Safranin, sehingga tampak kemerahan atau merah muda. Mereka juga memiliki membran luar tambahan yang mengandung lipid, yang dipisahkan dari dinding sel melalui ruang periplasma.

Relevansi Medis Dinding Sel Gram Negatif:

Dinding sel bakteri Gram negatif sering menjadi faktor virulensi yang memungkinkan bakteri patogen menyebabkan penyakit. Virulensi bakteri Gram-negatif sering dikaitkan dengan komponen tertentu dari dinding sel, khususnya lipopolisakarida (atau dikenal sebagai LPS atau endotoksin). Pada manusia, LPS memunculkan respon imun bawaan yang ditandai dengan produksi sitokin dan aktivasi sistem imun. Peradangan terjadi sebagai akibat dari produksi sitokin, yang juga dapat menghasilkan toksisitas inang.


Apakah pewarna dasar merupakan noda negatif?

Ada banyak perbedaan pewarnaan teknik. Metilen biru adalah noda sederhana yang mewarnai sel menjadi biru. Di sebuah pewarnaan negatif teknik, bermuatan negatif noda mewarnai latar belakang, membiarkan sel berwarna terang dan tidak ternoda. Sel-sel terang mudah terlihat dengan latar belakang gelap.

Demikian juga, mengapa menerapkan Nigrosin sebagai pewarna dianggap sebagai noda negatif? Bisa juga digunakan untuk noda sel yang terlalu halus untuk difiksasi dengan panas. Kita gunakan nigrosin sebagai kita noda negatif. Ini berarti bahwa noda mudah melepaskan ion hidrogen dan menjadi bermuatan negatif. Karena permukaan sebagian besar sel bakteri bermuatan negatif, permukaan sel menolak noda.

Orang mungkin juga bertanya, pewarna apa yang digunakan dalam pewarnaan negatif?

Bagaimana pewarna dasar dapat menodai bakteri?

Karena sel biasanya memiliki dinding sel bermuatan negatif, kromofor positif di pewarna dasar cenderung ke tongkat ke dinding sel, membuatnya positif noda. Di sisi lain, kromofor bermuatan negatif dalam asam pewarna ditolak oleh dinding sel bermuatan negatif, menjadikannya negatif noda.


Laporan Lab tentang Pewarnaan Sederhana Mikroba

Penafian: Karya ini telah dikirimkan oleh seorang siswa. Ini bukan contoh karya yang ditulis oleh penulis akademis profesional. Di sini Anda dapat memesan pekerjaan profesional. (Temukan harga yang sesuai dengan kebutuhan Anda)

* Hemat 10% untuk First Order, kode promo diskon "096K2"

1.0 Pendahuluan

Mikrobiologi adalah cabang biologi yang mempelajari mikroorganisme dan pengaruhnya terhadap organisme hidup lainnya. Mikroba adalah organisme yang sangat kecil yang hanya dapat dilihat dengan bantuan mikroskop. Beberapa kelompok organisme yang masuk dalam kategori ini adalah bakteri, cyanobacteria, fungi dan protista. Dalam kelompok ini terdapat beberapa spesies yang menarik bagi manusia karena kemampuannya menyebabkan penyakit atau penggunaannya dalam industri makanan dan mikroorganisme dapat diklasifikasikan menjadi uniseluler dan multiseluler. Organisme ini sangat beragam dalam jenis sel, ukuran, warna, dan energi reproduksi. Mikroba dapat diklasifikasikan berdasarkan jenis selnya. Semua sel dapat dikategorikan baik prokariotik atau eukariotik dan perbedaan utama antara kedua jenis sel ini adalah adanya nukleus yang terikat membran.

Makalah Term pada Laporan Lab Percobaan Konjugasi E. Coli

Konjugasi adalah proses alami yang melibatkan transfer DNA dari satu sel ke sel lain melalui koneksi fisik antar sel. Pada percobaan berikut, dua strain sel bakteri Escherichia coli (donor F’lac+strs dan penerima F-lac-strr) mengalami konjugasi untuk menghasilkan strain transkonjugan (F’lac+strr). Pelat MAC dan streptomisin digunakan.

Percobaan dilakukan dengan menggunakan mikroskop lapangan terang, mempersiapkan dan mengamati slide bakteri dan melakukan metode pewarnaan dan menjelaskan mekanisme bakteri. Untuk mengamati dan menyelidiki mikroba kita perlu menggunakan mikroskop dan Teknik Pewarnaan bakteri. Mikroskop adalah alat yang sangat berharga yang memungkinkan melihat objek atau struktur yang tidak akan diperhatikan oleh mata telanjang manusia. Selain itu, mikroskop dapat memperbesar objek hingga 1000 kali, mengungkapkan detail mikroskopis. Ia memiliki teknik dan optik khusus sehingga dapat mengungkapkan struktur dan biokimia sel hidup. Mikroskop terdiri dari kombinasi beberapa lensa optik. Dalam percobaan ini, kami menggunakan mikroskop cahaya.

Cahaya dilakukan melalui lensa kurva sedemikian rupa sehingga objek dapat dilihat lebih besar dari ukuran sebenarnya. Mikroskop cahaya pada percobaan ini memiliki lensa okuler dengan perbesaran 10X. Selain itu, ada juga empat lensa objektif yang berbeda untuk dipilih dari 10X, 40X, dan 100X. Untuk Metode Pewarnaan Bakteri, ada dua teknik dasar. Salah satunya adalah menggunakan metode mount basah tetapi bakteri terlalu kecil dan terlalu transparan untuk dijelaskan dengan baik menggunakan mikroskop cahaya dan jumlah basah. Oleh karena itu, mereka diwarnai untuk membuatnya lebih terlihat dengan memberikan kontras.

Pewarnaan sederhana, dengan hanya satu lapisan sel, diwarnai dengan warna yang berbeda dan pewarna biru metilen digunakan untuk membedakan Bacillus sp. Pewarnaan negatif sangat berguna untuk menentukan ukuran dan susunan sel dan dapat digunakan untuk menodai sel yang terlalu halus untuk difiksasi dengan panas. Dengan menggunakan teknik ini, larutan yang digunakan tidak mewarnai sel dan bakteri akan muncul sebagai bintik-bintik bening dengan latar belakang gelap.

Metode pewarnaan gram digunakan sebagai alat untuk membedakan bakteri Gram positif dan Gram negatif, sebagai langkah awal untuk menentukan identitas suatu sampel bakteri tertentu. Organisme Gram-positif dan Gram-negatif dibedakan satu sama lain oleh perbedaan dinding sel mereka, termasuk cara sel mengambil dan mempertahankan noda. E. coli, Bacillus sp dan mikroba yang tidak diketahui dikategorikan ke dalam yang mempertahankan kristal violet yodium setelah prosedur pencucian organik dan yang tidak. Pewarnaan Gram paling konsisten bila dilakukan pada bakteri yang kurang dari 24 jam, sedangkan kultur yang lebih tua mungkin tidak mempertahankan pewarnaan primer dan memberikan hasil yang tidak akurat. 2.0 Tinjauan Literatur

Makalah tentang Osmosis pada sel bawang merah

PENDAHULUAN Sebuah sel tumbuhan hidup akan menyusut atau membengkak tergantung pada konsentrasi zat terlarut sel dalam kaitannya dengan konsentrasi zat terlarut dari cairan yang mengelilingi sel (1). Oleh karena itu, air akan berpindah dari daerah dengan konsentrasi air tinggi ke daerah dengan konsentrasi air rendah. Oleh karena itu, jika sel ditempatkan dalam larutan hipertonik, air akan berpindah dari sel ke dalam larutan.

Alat yang digunakan untuk melihat benda yang terlalu kecil untuk dilihat dengan mata telanjang disebut mikroskop. Ini dapat memperbesar objek hingga 1.000 kali, mengungkapkan detail mikroskopis. Dengan teknik dan optik khusus, struktur dan biokimia sel hidup dapat diungkapkan. Ada berbagai jenis mikroskop, yang paling umum dan pertama ditemukan adalah mikroskop optik yang menggunakan cahaya untuk menggambarkan sampel. Meskipun, Zaccharias Janssen menemukan bahwa objek tampak sangat besar setelah bereksperimen dengan beberapa lensa dalam tabung pada tahun 1590 dan pada tahun 1609, Galileo menemukan prinsip-prinsip lensa, tetapi Anton van Leeuwenhoek adalah perancang mikroskop yang pertama kali mendeteksi mikroorganisme menggunakan mikroskop. Mikroskop cahaya menggunakan cahaya tampak untuk mendeteksi benda-benda kecil. Tantangan terbesar dalam melihat makhluk hidup adalah memperoleh kontras yang cukup, menemukan bidang fokus, memperoleh resolusi yang baik, dan mengenali subjek saat melihatnya.

Bakteri terkecil dapat diamati dan bentuk sel dikenali hanya dengan perbesaran 100x dan mereka tidak terlihat dalam mikroskop medan terang. Lensa okuler adalah sebuah silinder yang berisi dua atau lebih lensa. Fungsinya untuk membawa gambar menjadi fokus bagi mata. Pewarnaan adalah proses di mana mikroba diwarnai untuk meningkatkan kontras pada gambar mikroskopis. Noda atau pewarna adalah senyawa organik yang digunakan untuk menyoroti mikroorganisme atau jaringan biologis untuk dilihat dengan bantuan mikroskop.

Mikroba adalah struktur yang tidak berwarna dan sangat transparan karena memiliki indeks bias yang hampir sama dengan air. Oleh karena itu, mikroba tidak dapat dilihat dengan mata telanjang sehingga berbagai jenis metode pewarnaan digunakan untuk meningkatkan visibilitas dan kontras, menonjolkan fitur morfologi tertentu, untuk mendeteksi komponen mikroba ekstraseluler dan intraseluler dan melestarikannya untuk penggunaan di masa mendatang. Persyaratan dasar untuk pewarnaan adalah slide bebas lemak yang bersih, bakteri yang akan diwarnai, loop inokulasi dan pembakar Bunsen untuk mensterilkan loop inokulasi sebelum dan sesudah preparasi smear. Dua cara untuk memperbaiki slide adalah fiksasi panas dan fiksasi kimia. Fiksasi panas dapat dilakukan dengan melewatkan kaca objek di atas nyala api sedangkan fiksasi kimia dapat dilakukan dengan menggunakan etanol, metanol, asam pikrat, Kalium Permanganat atau uap Formaldehida.

Term Paper pada pewarnaan Gram Diferensial

. Pewarnaan Gram adalah prosedur pewarnaan yang paling banyak digunakan dalam bakteriologi. Disebut pewarnaan diferensial karena membedakan antara bakteri Gram-positif dan Gram-negatif. Bakteri. air suling) Gelas kaca bersih bebas lemak Loop kawat Nichrome Penetes Kertas saring Mikroskop senyawa Minyak kayu cedar Lain-lain PROSEDUR: Pada .

Fungsi fiksasi adalah untuk membunuh bakteri yang memberikan penanganan yang aman dan mencegah autolisis dengan menonaktifkan enzim autolitik. Selain itu, ini meningkatkan permeabilitas sel terhadap pewarnaan, membuat sel menjadi kaku dan membuka lipatan protein globular dan mengekspos kelompok reaktif dan meningkatkan afinitas terhadap pewarnaan. Noda yang berbeda memiliki afinitas yang berbeda untuk organisme yang berbeda dan mereka digunakan untuk membedakan berbagai jenis organisme. Bakteri sedikit bermuatan negatif pada pH 7,0 dan pewarna basa menodai bakteri sedangkan pewarna asam menodai latar belakang. Untuk pewarnaan sederhana, hanya satu pewarna yang digunakan. Pewarnaan sederhana lebih mudah dilakukan tetapi memiliki keterbatasan. Ini adalah metode yang mudah karena hanya menggunakan satu zat pewarna dan menggunakan pewarna basa atau asam. Ciri-ciri zat warna adalah memberi warna pada mikroorganisme dan mengikat secara spesifik berbagai struktur sel. Untuk pewarnaan sederhana digunakan pewarna dasar yang bermuatan positif. Pewarna ini akan menempel pada muatan negatif

sitoplasma organisme mikroba.

Pewarnaan negatif sangat berguna untuk menentukan ukuran dan susunan sel. Selain itu, dapat digunakan untuk menodai sel yang terlalu halus untuk difiksasi dengan panas. Pewarna asam seperti pewarna nigrosin (larutan 10%) dan pewarna India yang bermuatan negatif digunakan. Pewarna ini ditolak oleh sitoplasma mikroba yang bermuatan negatif. Oleh karena itu, larutan yang digunakan tidak mewarnai sel dan memberikan latar belakang yang kontras. Hal ini biasanya digunakan untuk menentukan bakteri dengan kapsul.

Teknik pewarnaan gram mengidentifikasi bakteri sebagai gram positif yang merupakan noda yang tertahan atau gram negatif yang berarti noda dicuci. Pada tahun 1884, Hans Christian Gram menemukan bahwa kristal violet secara permanen menodai bakteri tertentu tetapi dapat dicuci dari yang lain. Pewarnaan Gram dapat digambarkan sebagai suatu teknik pewarnaan yang digunakan untuk mengklasifikasikan bakteri yaitu bakteri yang diwarnai dengan kristal violet yang dilanjutkan dengan perlakuan singkat dengan Gram's iodine dan setelah dihilangkan warnanya dengan alkohol dan diberi perlakuan dengan safranin kemudian dicuci dengan air.

Makalah tentang Bakteri 2 Sel Bakteri

Menjelaskan struktur dan proses hidup bakteri. Sel bakteri, seperti sel tumbuhan, dikelilingi oleh dinding sel. Namun, dinding sel bakteri terdiri dari rantai polisakarida yang terkait dengan asam amino, sedangkan dinding sel tumbuhan terdiri dari selulosa, yang tidak mengandung asam amino. Banyak bakteri mengeluarkan kapsul berlendir di sekitar bagian luar dinding sel. Kapsul memberikan tambahan.

Mereka yang mempertahankan kristal violet adalah Gram-positif dan mereka yang tidak mempertahankannya adalah Gram-negatif. Fungsi yodium sebagai mordan untuk membantu kristal violet mengikat lebih kuat. Bakteri gram positif memiliki banyak lapisan peptidoglikan yang mempertahankan kristal violet saat dengan cepat dibilas dari bakteri gram negatif karena peptidoglikan mereka adalah satu lapisan tebal. Bakteri tersebut diwarnai dengan safranin yang tidak akan muncul pada Gram-positif yang sudah berwarna ungu tetapi akan menodai bakteri Gram-negatif yang tidak berwarna menjadi merah.

Gambar 3: Perbedaan dinding sel

1) Mikroskop dihidupkan, dan kemudian sumber cahaya disesuaikan. 2) Lensa objektif diturunkan jauh ke bawah tanpa menyentuh kaca objek. 3) Dengan menggunakan klip pengikat slide diikat di atas panggung mikroskop. 4) Saat melihat lensa mata, iluminator dan diafragma disesuaikan. 5) Penyesuaian kasar secara perlahan disesuaikan sampai citra keinginan terfokus. 6) Slide dipindahkan ke tengah bidang untuk fokus ke gambar yang diinginkan. 7) Geser diamati melalui objektif daya rendah (x10), objektif kering tinggi (x40) dan objektif minyak imersi (x100) untuk tampilan kultur yang lebih jelas. 8) Panggung diturunkan ke posisi minimum setelah selesai menggunakan mikroskop. Saklar dimatikan dan mikroskop ditutup kembali. B) Teknik pewarnaan bakteri

I) Pewarnaan sederhana

1) Slide yang direndam alkohol dijalankan di atas nyala api pembakar Bunsen. Satu tetes air diteteskan ke kaca objek yang bersih dengan menggunakan loop steril. 2) Kultur Bacillus sp. disebar ke permukaan seluncuran air, sekali lagi dengan menggunakan loop steril. Loop disterilkan lagi untuk membunuh mikroba berlebih. 3) Gelas yang dikandung biakan dilewatkan dengan cepat melalui nyala api pembakar Bunsen selama dua detik untuk masing-masing dua atau tiga kali. 4) Preparat digenangi dengan pewarna biru metilen selama satu menit. 5) Preparat dibilas dengan air dan dikeringkan dengan kertas bibulous. 6) Preparat preparat diperiksa di bawah mikroskop dengan lensa objektif berdaya rendah (x10), objektif berdaya kering tinggi (x40) dan objektif berdaya minyak imersi (x100) untuk mendapatkan gambaran mikroorganisme yang terbaik. 7) Morfologi mikroorganisme digambar.

Esai tentang Menerapkan Teknik Pewarnaan Untuk Melihat Dan Mengidentifikasi Bakteri

. ditempatkan pada slide sehingga lensa objektif minyak pada mikroskop cahaya digunakan. Bakteri dilihat dan . untuk menghancurkan bakteri. Dari pewarnaan gram, dapat ditentukan bakteri mana yang gram positif atau gram negatif. Ini adalah . untuk menghancurkan bakteri. Dari pewarnaan gram dapat ditentukan bakteri mana yang gram positif atau gram negatif. Ini adalah .

8) Prosedur diulangi dengan bakteri E. coli.

1) Slide yang direndam alkohol dijalankan di atas nyala api pembakar Bunsen. Bacillus sp. biakan disebarkan ke permukaan slide, dengan menggunakan loop steril. Slide diatur ke udara kering tanpa terkena panas. 2) Dua sampai tiga larutan pewarna Nitrogen diteteskan ke apusan. 3) Larutan zat warna Nitrogen ditebarkan dengan menggunakan tepi sisi geser yang lain menjadi satu lapisan tipis. 4) Preparat yang telah disiapkan dibiarkan kering oleh udara.

5) Preparat preparat diperiksa di bawah mikroskop dengan lensa objektif berdaya rendah (x10), objektif berdaya kering tinggi (x40) dan objektif berdaya minyak imersi (x100) untuk mendapatkan gambaran mikroorganisme yang terbaik. 6) Morfologi mikroorganisme digambar.

7) Prosedur diulangi dengan bakteri E. coli.

1) Slide yang direndam alkohol dijalankan di atas nyala api pembakar Bunsen. Bacillus sp. biakan disebarkan ke permukaan slide, dengan menggunakan loop steril. Slide diatur ke udara kering dan terkena panas selama beberapa detik. 2) Kaca objek ditambahkan larutan kristal violet dan dibiarkan selama satu menit. 3) Kaca objek dibilas dengan air dan digenangi dengan larutan iodin selama satu menit. 4) Preparat dicuci dengan air dan ditambahkan decolourizer sampai warna kristal violet hilang. Geser dibilas dengan air. 5) Safranin ditambahkan dan menunggu sebentar. Kemudian slide yang telah disiapkan dicuci dengan air selama maksimal 5 detik. 6) Slide yang telah disiapkan dikeringkan dengan kertas bibulous dan dibiarkan kering di udara. 7) Preparat preparat diperiksa di bawah mikroskop dengan lensa objektif berdaya rendah (x10), objektif berdaya kering tinggi (x40) dan objektif berdaya minyak imersi (x100) untuk mendapatkan gambaran mikroorganisme yang terbaik. 8) Morfologi mikroorganisme digambar.

Kertas Istilah tentang Pewarnaan Cepat Asam

. tahan pewarnaan dengan metode biasa seperti pewarnaan Gram.[1] Ini juga dapat digunakan untuk menodai beberapa bakteri lain, seperti . metode karena slide yang dihasilkan oleh metode ini dapat divisualisasikan menggunakan mikroskop medan terang standar. Metode fluorokrom. Periksa slide dengan mikroskop fluoresensi yang dilengkapi dengan filter exciter BG-12 dan filter penghalang OG-1. Bakteri tahan asam muncul sebagai .

9) Prosedur diulangi dengan bakteri E. coli. dan contoh E2.

Lingkungan percobaan dijaga sesteril mungkin dengan melakukan percobaan dalam jarak 10 sentimeter dari nyala api dari Pembakar Bunsen. Hal ini untuk menghindari kontaminasi sampel oleh mikroba di udara. Sarung tangan dipakai untuk tujuan yang sama. Loop yang digunakan untuk mengoleskan mikroba ke slide disterilkan tiga kali dalam nyala api. Sementara itu, kaca objek dengan sampel terpasang untuk memfiksasi bakteri pada kaca objek. Sekarang tentang noda, pewarna biru metilen digunakan untuk membuat sel dan inti lebih terlihat6. Kristal violet digunakan untuk mewarnai dinding sel bakteri6, yang terdiri dari peptidoglikan.

Nigrosin berwarna gelap, oleh karena itu digunakan dalam pewarnaan negatif untuk memberikan latar belakang gelap di mana mikroba putih dapat dilihat. Pada pewarnaan Gram, sel diwarnai dengan pewarna kristal violet. Selanjutnya, larutan yodium Gram (yodium dan kalium iodida) ditambahkan untuk membentuk kompleks antara kristal violet dan yodium. Kompleks ini adalah molekul yang lebih besar dari pewarna kristal violet asli dan yodium dan tidak larut dalam air. Alkohol ditambahkan ke sampel sebagai penghilang warna, yang mengeringkan lapisan peptidoglikan, menyusut dan mengencangkannya. Kompleks kristal violet-iodin yang besar tidak mampu menembus lapisan peptidoglikan yang mengencang ini, dan dengan demikian terperangkap di dalam sel bakteri Gram positif.

Sebaliknya, membran luar bakteri Gram negatif terdegradasi dan lapisan peptidoglikan yang lebih tipis dari sel Gram negatif tidak mampu mempertahankan kompleks kristal violet-iodin dan warnanya hilang. Sebuah counterstain, safranin, ditambahkan ke sampel, pewarnaan itu merah. Karena safranin lebih ringan dari kristal violet, safranin tidak mengganggu warna ungu pada sel Gram positif. Namun, sel-sel Gram negatif yang tidak berwarna diwarnai merah. Bakteri gram positif (dengan lapisan peptidoglikan yang lebih tebal) mempertahankan pewarnaan kristal violet selama proses penghilangan warna, sedangkan bakteri Gram negatif kehilangan pewarna kristal violet dan malah diwarnai oleh safranin pada proses pewarnaan akhir.6 Dari pengamatan kami dari pewarnaan sederhana Bacillus sp , dapat dilihat bahwa bakteri berbentuk batang.

Bakteri diwarnai biru tua, tidak ada struktur internal yang terlihat. Untuk pewarnaan negatif, pewarnaan negatif menggunakan pewarna nigrosin, yang merupakan pewarna asam. Dengan melepaskan proton (sebagai asam), kromofor pewarna menjadi bermuatan negatif. Karena dinding sel juga bermuatan negatif, hanya latar belakang di sekitar sel yang akan ternoda, sehingga sel tidak ternoda. Oleh karena itu, sel terlihat sebagai bintik putih dengan latar belakang gelap. E.coli juga berbentuk batang. Setelah pewarnaan gram untuk E.coli, E.coli muncul sebagai warna merah muda, menunjukkan itu adalah bakteri gram negatif sedangkan Bacillus sp menunjukkan warna ungu, artinya itu adalah bakteri gram positif. Mikroba yang tidak diketahui dari cawan petri

1ternyata merupakan campuran bakteri gram negatif dan gram positif karena adanya daerah merah muda dan ungu muda. Mereka berbentuk bulat.

5.0 Pertanyaan

1) Morfologi meliputi ukuran, struktur sel, keberadaan endospora dan flagela. From the report, in Figure 8, the unknown microbes from petri dish 1 give purple and pink colouration after gram staining, they’re round in shape. A more reliable method to identify cell morphology would be to use special stains to identify specific parts of a microbe like endospores, which is usually present in gram positive bacteria. The method use to stain endospores is called the Schaeffer-Fulton1 method, where Malachite Green is used to stain the endospores while Safranin is a counterstain. The end result would be pink bacteria with green dots within them. 2) Three methods to characterise a microorganism include:

I) Starch hydrolysis test

This bio-chemical test is used on gram-positive bacteria to identify bacteria that can hydrolyze starch (amylose and amylopectin) using the enzymes a-amylase and oligo-1,6-glucosidase. Often used to differentiate species from the general Clostridium and Bacillus. Because of the large size of amylose and amylopectin molecules, these organisms cannot pass through the bacterial cell wall. In order to use these starches as a carbon source, bacteria must secrete a-amylase and oligo-1,6-glucosidase into the extracellular space.

These enzymes break the starch molecules into smaller glucose subunits which can then enter directly into the glycolytic pathway. In order to interpret the results of the starch hydrolysis test, iodine must be added to the agar. The iodine reacts with the starch to form a dark brown colour. Thus, hydrolysis of the starch will create a clear zone around the bacterial growth. Misalnya. Bacillus subtilis is positive for starch hydrolysis.2 ii) Protein analysis (gel electrophoresis, SDS-PAGE, establishment of clonality) The size and other differences between proteins among different organisms can be determined by using protein separation methods, collectively known as gel electrophoresis.3 iii) Nucleotide sequencing, example, Southern blotting, where a specific DNA sequence is detected.4 3)

Full standard procedure for operating a microscope5:

Saya. When moving a microscope, always carry it with both hands. Grasp the arm with one hand and place the other hand under the base for support. ii. Turn the revolving nosepiece so that the lowest power objective lens is “clicked” into position. aku aku aku. The microscope slide should be prepared with a coverslip or cover glass over the specimen. This will help protect the objective lenses if they touch the slide.

Place the microscope slide on the stage and fasten it with the stage clips. iv. Look at the objective lens and the stage from the side and turn the coarse focus knob so that the objective lens moves downward (or the stage, if it moves, goes upward).

Move it as far as it will go without touching the slide. v. Look through the eyepiece and adjust the illuminator (or mirror) and diaphragm for the greatest amount of light. vi. Slowly turn the coarse adjustment so that the objective lens goes up (away from the slide).

Continue until the image comes into focus. Use the fine adjustment, if available, for fine focusing. If the microscope has a moving stage, then turn the coarse knob so the stage moves downward or away from the objective lens. vii. Move the microscope slide around so that the image is in the center of the field of view and readjust the mirror, illuminator or diaphragm for the clearest image. viii. Then change to the next objective lens with only minimal use of the focusing adjustment. Use the fine adjustment, if available. If you cannot focus on your specimen, repeat steps 4 through 7 with the higher power objective lens in place. ix.

The proper way to use a monocular microscope is to look through the eyepiece with one eye and keep the other eye open (this helps avoid eye strain).

x. Do not touch the glass part of the lenses with your fingers. Use only special lens paper to clean the lenses. xi. When finished, lower the stage, click the low power lens into position and remove the slide. xii. Always keep your microscope covered when not in use. Dust is bad for the microscope. 4) Three accidents that can occur during the experiment are: i. A sleeve catching fire while passing the slide through the flame in wide sweeping motions ii. the slide dropping due to a weak grip on it

The slide breaking due to over-exposure to fire and a strong grip.

The staining techniques in this experiment are the correct way to identify the shape and size of the bacteria. Bacillus sp is rod-shaped and gram positive while E.coli is rod-shaped and gram negative. The unknown microbes from petri dish 1 are a mixture of gram-positive and gram-negative bacteria and are round.

7.0 Recommendations

It is suggested that a smaller amount of microbes are smeared on the glass slide to prevent the sample from looking so dense under the microscope, thus preventing us from seeing the shape and size clearly. Next, increase the amount of the negative stain to ensure more visibility of the cells under the microscope. Lastly, clean the lens of the microscope before use to avoid confusing images in the eyepiece.

Referensi

1) Endospores, retrieved from: http://pscantie.myweb.uga.edu/stain.html 2) Rachel Watson M.S., retrieved from: http://www.uwyo.edu/molb2210_lab/info/biochemical_tests.htm#starch 3) Stephen T. Abedon, 6th July 1999, retrieved from: http://www.mansfield.ohio-state.edu/

sabedon/biol3010.htm 4) McGraw-Hill, retrieved from: http://highered.mcgraw-hill.com/olcweb/cgi/pluginpop.cgi?it=swf::535::535::/sites/dl/free/0072437316/120078/bio_g.swf::Southern%20Blot 5) How to Use a Microscope, retrieved from: http://www.microscope-microscope.org/basic/how-to-use-a-microscope.htm 6) Monica Z. Bruckner,Microbial Life Edcucational resources , retrieved from : http://pscantie.myweb.uga.edu/stain.html 7) Bio-imaging, 2004, retrieved from: http://web.path.ox.ac.uk/

bioimaging/bitm/instructions_and_information/EM/neg_stain.pdf 8) Staining, retrieved from: en.wikipedia.org/wiki/staining

9) Definition of staining, retrieved from: www.thefreedictionary.com/staining 10) Monica Z. Bruckner, Gram Staining, retrieved from: serc.caleton.edu/microbiolife/research_methods/microscopy/gramstain.html 11)

Similar Papers

The Microscope Experiment 1 Cells

. X 15. On a typical monocular microscope objectives magnification found is as followed: . cardiac muscle cell, may be indistinct unless special staining techniques are . slides come in many come colours and shape it depends on what specimen and which stain .

Bacteria Morphology

. slides and interpreting the findings of bacteria through direct and indirect staining technique. Hypothesis – The experiment will allow for further insight into stained . first portion consisted of a virtual microscope, it allowed for a different .

Gram Positive And Gram Negative Bacteria

. Unlike gram negative, gram positive bacteria have a violet color in gram staining. Due to high lipid and low peptidoglycan content of the cell wall of gram negative bacteria, the .

Impact Of Light And Electron Microscope On Cell Theory

. resolution but is restricted to dead cells. Without microscopes to view cells, the cell theory would not exist and many . made of cells, cells are the smallest units of life and that all cells come from pre-existing cells. Staining techniques later .

Cell Organelles Worksheet key

. structure that gives the cell its shape in plants, fungi, most bacteria and some protists Cell Wall 12. Produces a . 8. Digests excess or worn-out cell parts, food particles and invading viruses or bacteria Lysosome/Peroxisome 9. Small bumps located .


Commercial uses of non-pathogenic Gram-positive bacteria

Many streptococcal species are nonpathogenic, and form part of the commensal human microbiome of the mouth, skin, intestine, and upper respiratory tract. They are also a necessary ingredient in producing Emmentaler (Swiss) cheese.

Non-pathogenic species of corynebacterium are used in industrial production of amino acids, nucleotides, bioconversion of steroids, degradation of hydrocarbons, cheese ageing, production of enzymes etc.

Many Bacillus species are able to secrete large quantities of enzymes.

  • Bacillus amyloliquefaciens is the source of a natural antibiotic protein barnase (a ribonuclease), alpha amylase used in starch hydrolysis, the protease subtilisin used with detergents, and the BamH1 restriction enzyme used in DNA research.
  • C. thermocellum can utilize lignocellulose waste and generate ethanol, thus making it a possible candidate for use in production of ethanol fuel. It is anaerobic and is thermophilic, which reduces cooling cost.
  • C. acetobutylicum, also known as the Weizmann organism, was first used by Chaim Weizmann to produce acetone and biobutanol from starch in 1916 for the production of gunpowder and TNT.
  • C. botulinum produces a potentially lethal neurotoxin that is used in a diluted form in the drug Botox. It is also used to treat spasmodic torticollis and provides relief for approximately 12 to 16 weeks.

The anaerobic bacterium C. ljungdahlii can produce ethanol from single-carbon sources including synthesis gas, a mixture of carbon monoxide and hydrogen that can be generated from the partial combustion of either fossil fuels or biomass.


Tonton videonya: Pewarnaan Gram - Mikrobiologi (Juni 2022).


Komentar:

  1. Livingston

    There are seconds when the minutes decide everything. And it lasts for hours. Financial and sexual crisis: you open your wallet, and there you dick I loved you - the trees were bent. There is a jock, it is bobbing ... "The breast is the face of a woman!" Strip and Conquer!

  2. Edern

    It is logical, I agree

  3. Skene

    Apa kata-kata yang tepat ... super, frase yang bagus

  4. Moketaveto

    Apakah dia serius?

  5. Aldtun

    Benar-benar dengan Anda itu setuju. Di dalamnya ada sesuatu yang juga merupakan ide bagus, setuju dengan Anda.



Menulis pesan